Fotometr je optický přístroj sloužící ke stanovení koncentrace látek v roztocích absorbujících elektromagnetické záření v ultrafialové nebo viditelné oblasti. Na rozdíl od spektrofotometru umožňuje měření jen při některých vybraných vlnových délkách.
Princip:
Polychromatické záření vysílané zdrojem prochází filtrem (typ monochromátoru), kyvetou se zkoumaným vzorkem (absorbuje záření o dané vlnové délce) a dopadá na detektor (převádí intenzitu prošlého záření na elektrický signál). Velikost výsledného elektrického proudu je měřena galvanometrem cejchovaným v jednotkách absorbance.
Podle konstrukce rozeznáváme fotometry jednopaprskové a dvoupaprskové. Ve cvičení budeme pracovat s fotometrem jednopaprskovým.
Obr.1:
Schematické znázornění jednopaprskového absorpčního fotometru.
Z
......... zdroj záření F .......... filtr
K
......... kyveta D ......... detektor
G
......... galvanometr
– – – záření
......... elektrický
proud
Postup:
–
Zapneme přístroj, necháme 15 min žhavit. Na
displeji se objeví: menue
blank mg/L
sample xx
xx
xx
–
Stisknutím červeného tlačítka menue zvolíme
menue. Objeví se: documentation
* form of ind.
absorbance
factor
– Šipkou posuneme hvězdičku do polohy * absorbance.
–
Stiskneme zelené tlačítko ¿.
Objeví se: menue
zero
meas
xxx nm
– Přepínač vlnové délky nastavíme do potřebné polohy. Hodnota zvolené vlnové délky se zobrazí vpravo dole na displeji.
– Úplně doprava do držáku kyvet vložíme kyvetu se srovnávacím vzorkem. V případě špatného vložení kyvety se zobrazí cuvette of order. Po správném vložení se na displeji zobrazí nápis meas a pak se vypíše absorbance roztoku v kyvetě. Abychom tuto hodnotu nemuseli od absorbance vzorků odečítat, stiskneme zero. Zobrazí se nápis baseline a po několika vteřinách 0,000 E. Od této chvíle fotometr provádí odečítání za nás a zobrazuje až výsledek.
– Vyjmeme srovnávací vzorek a vložíme kyvetu s měřeným vzorkem. Po vložení kyvety se zobrazí nápis meas a potom číselná hodnota absorbance.
– Po vyjmutí a opětovném vložení kyvety se vzorkem nebo po stisknutí se měření absorbance automaticky opakuje.
– Po ukončení práce přístroj hlavním vypínačem vypneme.
Pozn. 1: Po každé změně vlnové délky je nutno znovu vložit kyvetu se srovnávacím vzorkem a nastavit odečítání jeho absorbance při nově zvolené vlnové délce.
Pozn. 2: Měření provádíme ve dvojici kyvet o stejné tloušťce. Dvojici okének kyvet, kterými bude při měření procházet paprsek, před prací opláchneme vodou (případně ethanolem) a vyleštíme papírovým tamponem. Od této chvíle se již této dvojice okének nesmíme dotknout.
Pozn. 3: Provádíme-li měření s roztokem, který zbarvuje stěny kyvety (např. roztok krystalové violeti), je po práci nutno kyvety propláchnout ethanolem.
Obr.2: Photometer MPM 3000.
V
... hlavní vypínač
F
... přepínač filtrů (volba vlnové délky)
K
... držák kyvet
D
... displej
O
... tlačítka pro ovládání fotometru