Spojení kapilární elektroforézy s molekulovou a prvkovou desorpční hmotnostní spektrometrií pro analýzu metaloproteinů
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2013 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Analýza proteinových komplexů s kovy je obvykle založena na spojení separačních technik se specifickou detekcí, přičemž pro kolonové separace se používá on-line spojení s molekulovou hmotnostní spektrometrií (MS) pomocí ionizace elektrosprejem (ESI) a s prvkovou MS pomocí zmlžovače s indukčně vázaným plazmatem (ICP). Alternativními nástroji molekulové a prvkové analýzy jsou hmotnostní spektrometrie využívající laserové desorpce a ionizace za účasti matrice (MALDI) a laserové desorpce za účasti substrátu (SALD). V tomto příspěvku byla představena nová metoda analýzy metaloproteinů a metalopeptidů založené na off-line analýze frakcí získaných ze záznamu jediné separace. Frakce z kapilární elektroforézy (CE) jsou nanášeny na speciální terčík a analyzovány postupně MALDI MS a SALD ICP MS. Koncept je demonstrován na CE-MALDI MS/SALD ICP MS analýze izoforem metalothioneinů (MT); směs izoforem MT je separována v nepokryté křemenné kapiláře (70 cm, 75 um), jako základní elektrolyt je použit 20 mM hydrogenuhličitan amonný, pH 7,4. Použití kapalinového spoje a subatmosferické komory, je eluát z CE nanášen na terčík z polyethylenglykol tereftalátu pokrytý tenkou zlatou vrstvou. Hmotnostní spektra MALDI apoforem MT jsou zaznamenána po přidání matice, poté je zbytek frakcí analyzován pomocí SALD ICP MS, jež poskytuje informace o obsahu kovů. Jediná separace je tedy zdrojem jak proteomické, tak metalomické informace. Přídavek chladnější matrice navíc umožňuje získat z vybraných frakcí hmotnostní spektra komplexů MT s kovy. Výhodou prezentovaného konceptu je též fakt, že oba hmotnostní spektrometry nemusí být poblíž separační jednotky. |
| Související projekty: |