Molekulárně-biologická diagnostika spirochety Treponema pallidum v biologickém materiálu.
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2006 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | X. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů. Sborník příspěvků. |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Klíčová slova | Treponema pallidum subsp. pallidum; detection in clinical specimens; molecular typing; mucocutaneous swabs. |
| Popis | Prováděli jsme izolaci a detekci treponemální DNA (mikroorganismu Treponema pallidum subsp. pallidum) z různých klinických materiálů. Získaný biologický materiál jsme vyšetřili u pacientů s podezřením na syfilis, a to ve stádiu primárním, sekundárním, časně latentním a pozdně latentním včetně kongenitální syfilis. Klinické vzorky zahrnovaly kožní a slizniční stěry, séra, krevní sraženiny, likvory a tkáně. Celkem jsme vyšetřili 179 klinických vzorků, z toho 141 sér, 26 stěrů, 10 krevních sraženin, 1 likvor a 1 tkáň. Z tohoto výčtu vzorků jsme nalezli 7 pozitivních stěrů od 4 pacientů ve stádiu primární a sekundární syfilis. Dále jsme u novorozence s kongenitální syfilis prokázali tyto pozitivní vzorky: 1 likvor, 1 sérum a 1 stěr. U všech vyšetřovaných vzorků jsme provedli detekci treponemální DNA pomocí dvoukrokové (nested) PCR (polymerázové řetězové reakce) na gen tmpC (TP0319, kódující membránový lipoprotein). PCR produkty (z genu TP0319) o velikosti 451 bp jsme štěpili pomocí 3 restriktáz, Sac I, Nhe I, Dde I, k odlišení jednotlivých kmenů Treponema pallidum. Pro přesnou kmenovou typizaci jsme amplifikovali geny TP0548, TP0136, TP0319 a vzniklé PCR produkty sekvenovali.Výsledky sekvenací ve dvou případech ukázaly výskyt kmene sekvenčně totožného s kmenem SS14 a v dalších dvou případech jsme nalezli sekvenční změny v lokusech TP0548 a TP0136, které prokázaly výskyt unikátních syfilitických kmenů, doposud nepopsaných u Treponema pallidum subsp. pallidum. U jednoho vyšetřovaného novorozence jsme porovnali počet molekul DNA ve 2 různých biologických materiálech (v séru a v likvoru). |
| Související projekty: |