Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2010 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Úvod: Schopnost homocysteinu způsobovat oxidativní stres je všeobecně známa. Reaktivní formy kyslíku (ROS) vznikají během autooxidace homocysteinu a ke vzniku neplodnosti mužů přispívají v 30 – 80 % případů. Jedním z mechanismů je přímé poškození DNA spermií. Normálně je DNA ve spermiích pevně obalena protaminy, které ji chrání před atakem ROS. Ve spermiích neplodných mužů byla prokázána nedostatečná protaminace DNA, jejímž následkem je zvýšená citlivost DNA k oxidativnímu poškození. Cílem této práce bylo zjistit, zda má zvýšená koncentrace homocysteinu v ejakulátu vliv na integritu DNA spermií. Materiál a metodika: Byly použity vzorky ejakulátů odebrané v Centru asistované reprodukce FN Brno. Všechny vzorky byly vyšetřeny mikroskopicky a měly normální hodnoty spermiogramu. Ejakulát byl ponechán 1 hodinu při pokojové teplotě do úplného zkapalnění a přibližně 1 ml zkapalněného ejakulátu byl zmrazen v tekutém dusíku bez kryoprotektivních látek a uchován pro další analýzu. Po rozmražení při pokojové teplotě byl každý vzorek rozdělen po 100 ul a bylo přidáno 100 ul roztoku homocysteinu v koncentracích 5, 12,5, 25 a 50 umol/l. Vzorky pak byly inkubovány přes noc (14 hodin) v termostatu při teplotě 36 stupních C. Ke sledování integrity DNA jsme využili kometovou analýzu. Metoda je založena na elektroforéze jaderné DNA buněk, imobilizovaných v agarózovém gelu, která následuje po lýze a denaturaci DNA. Použita byla alkalicko-neutrální modifikace analýzy (denaturace v alkalickém prostředí s pH > 13, elektroforéza v Tris-borátovém pufru, pH = 10). Vizualizace komet byla provedena barvením roztokem dusičnanu stříbrného, poškození DNA bylo vyjádřeno jako % DNA v ohonu komety a délka ohonu. Pro srovnání poškození DNA byl použit párový t-test. Výsledky: Bazální poškození představovalo 72% DNA v ohonu, statisticky významné zvýšení poškození bylo pozorováno pouze při inkubaci spermií s homocysteinem v koncentraci 50 umol/l (81,5% DNA v ohonu). Závěr: Homocystein přidaný k ejakulátu normospermiků mírně zvyšuje bazální poškození DNA. |
| Související projekty: |