Directed evolution of lectins from pathogenic bacteria
| Název česky | Řízená evoluce lektinů z patogenních bakterií |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2011 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Řízená evoluce je široce využívána v proteinovém inženýrství pro tvorbu proteinů s pozměněnými, anebo vylepšenými vlastnostmi. Tento účinný nástroj zahrnuje několik hlavních přístupů. První je náhodná mutageneze, která je využívána pro tvorbu náhodných mutací kdekoliv ve vybraném genu. Druhý je cíleně-náhodná mutageneze, která se používá při přípravě mutantů s náhodnými změnami v konkrétním místě. Místně-cílená mutageneze je založena na racionálním designu a slouží ke tvorbě specifických substitucí na konkrétním místě. V naší práci se zaměřujeme na dva přístupy: cíleně-náhodnou mutagenezi pomocí směsi oligonucleotidových primerů a místně-cílenou mutagenezi pomocí dvou primerů nesoucích specifickou substituci. Lektiny jsou proteiny produkované různými organismy. Jsou schopny specificky vázat různé sacharidy. Tento fakt je velice důležitý zejména v interakci patogenu a hostitele, kde lektiny pomáhají patogenu při adhezi k cukerným zbytkům přítomných na hostitelské buňce. Pseudomonas aeruginosa, Ralstonia solanacearum a Burkholderia cenocepacia jsou příležitostné patogeny, které napadají zejména pacienty s oslabenou obranyschopností. Tyto bakterie produkují lektiny, které vykazují značnou podobnost. Lektin PA-IIL z bakterie P. aeruginosa byl zvolen jako primární cílový gen k modifikaci za pomocí místně-cílené mutageneze. Tento rozpustný protein je dobře charakterizován a vykazuje velmi vysokou afinitu k L-fucose, nicméně je schopen vázat několik monosacharidů s podobnou stereochemií jako například L-galaktosu, nebo D-manosu. Ortology tohoto lektinu byly identifikovány také v bakteriích R. solanacearum (RS-IIL) a B. cenocepacia (BC2L-A). Nicméně, tyto dva lektiny podobné PA-IIL preferují D-manosu namísto L- fucosy. Cílem této práce je příprava Ca-dependentních lektinů s přesnou specifitou k L-fucose. Lektin s vylepšenými vlastnostmi by mohl být dále využíván v biotechnologii a pro bioanalytické účely. |
| Související projekty: |