Random mutagenesis as a tool for improving properties of PA-IIL lectin from Pseudomonas aeruginosa

Logo poskytovatele

Varování

Publikace nespadá pod Pedagogickou fakultu, ale pod Přírodovědeckou fakultu. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Název česky Náhodná mutageneze jako nástroj pro vylepšení vlastností lektinu PA-IIL z Pseudomonas aeruginosa
Autoři

MRÁZKOVÁ Jana POKORNÁ Martina WIMMEROVÁ Michaela

Rok publikování 2010
Druh Konferenční abstrakty
Fakulta / Pracoviště MU

Přírodovědecká fakulta

Citace
Popis Náhodná mutageneze je nejužitečnější přístup v rámci řízené evoluce a je široce využívána v proteinovém inženýrství k produkci proteinů s pozměněnými anebo vylepšenými vlastnostmi. Náhodná mutageneze zahrnuje mnoho metod, které jsou používány pro přípravu rozsáhlých knihoven mutantů. Jednou z těchto metod je i error-prone PCR. Tato technika zavádí nukleotidové změny během PCR díky použití DNA polymerasy náchylné k chybám a mutačním reakčním podmínkám. LecB je cílový gen vybraný pro modifikaci pomocí náhodné mutageneze. Tento gen kóduje lektin PA-IIL z bakterie Pseudomonas aeruginosa. Tento lektin je velmi dobře charakterizovaný a je nesporné, že vykazuje neobvykle vysokou afinitu k monosacharidům široce se vyskytujícím jako terminální residua glykokonjugátů buněčného povrchu, které sou přítomné v mucinech pacientů s cystickou fibrosou. Náhodná mutageneze by mohla pomoci s vytvořením proteinu se zajímavě pozměněnými vlastnostmi vůči specifitě. Po několika pokusech s komerčními kity, které neposkytovaly očekávané procento mutovaných aminokyselin jsme zoptimalizovali reakční podmínky error-prone PCR abychom dostali vyhovující výsledky. Nakonec jsme získali účinnou metodu, která zavádí náhodné mutace do cílového genu v dostatečné míře. V současné době jsou optimalizovány metody pro high-throughput screening knihoven mutantů, aby byly nalezeni mutant se změněnou afinitou anebo specifitou. Mutované lektiny s vylepšenými vlastnostmi mohou být dale využity v biotechnologii a pro bioanalytické účely.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.