One point mutation can overturn sugar-binding specificity of lectin RS-IIL from plant pathogen Ralstonia solanacearum
| Název česky | Jedna bodová mutace může převrátit cukernou specifitu lektinu RS-IIL pocházejícího z rostlinného patogena Ralstonia solanacearum |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2015 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Půdní bakterie Ralstonia solanacearum je agresivním fytopatogenem, který způsobuje závažná vadnutí mnoha ekonomicky důležitých plodin v tropických a subtropických oblastech. Tento patogen produkuje dva lektiny: RSL a RS-IIL. Lektiny jsou proteiny, které vazají cukry, ale nepatří mezi protilátky ani enzymy. Často hrají důležitou roli v rozpoznávání a interakci hostitele s patogenem. Lektin RS-IIL patří do takzvané "PA-IIL nadrodiny", která zahrnuje také lektiny PA-IIL (Z P. aeruginosa), CV-IIL (z C. violaceum), BC2L-A a BC2L-C (z B. cenocepacia). Tyto lektiny jsou ortology s významnými sekvenčními a strukturními podobnostmi. Ačkoli vázají sacharidy s podobnou stereochemií, liší se v preferencích vůči těmto sacharidům. Tento fakt je způsoben rozdílem tří aminokyselin, které jsou uspořádány v takzvané "smyčce specifity". Adam et al. připravili tři bodové mutanty lektinu PA-IIL aby detailně prozkoumali specifitu. Vyměnili každou aminokyselinu ze "smyčky specifity" za tu, která se nachází ve vazebném místě RS-IIL. Následné strukturní a termodynamické studie potvrdily, že aminokyselina v pozici 22 je nejvíce zodpovědná za specifitu vůči cukrům. Mutate v této pozici vedla k převrácení cukerné preference z PA-IIL na cukernou preferenci lektinu RS-IIL. V naší práci jsme připravili mutanta lektinu RS-IIL se substitucí aminokyseliny v pozici 22 na aminokyselinu, která je v této pozici ve "smyčce specifity" lektinu PA-IIL, abychom otestovali možnost převrácení cukerné preference RS-IIL na cukernou preferenci PA-IIL. Použili jsme rezonanci povrchového plasmonu a isotermální titrační mikrokalorimetrii ke zkoumání interakcí tohoto mutanta se sacharidy. Během této práce jsme také vylepšili rychlou a levnou metodu k rychlému určení specifity lektinů metodou pozorování aglutinace pod mikroskopem. |
| Související projekty: |