Detekce Treponema pallidum subsp. pallidum v biologickém materiálu, výhledy pro epidemiologii syfilis
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2006 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | XXI. Pečenkovy epidemiologické dny. |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Genetika a molekulární biologie |
| Klíčová slova | Treponema pallidum subsp. pallidum; detection in the clinical material; molecular typing; mucocutaneous swabs |
| Popis | V této práci jsme se zaměřili na molekulárněbiologickou diagnostiku spirochety Treponema pallidum, a to v různém biologickém materiálu. Vyšetřované klinické vzorky pocházely od pacientů ve stádiu primárním, sekundárním, časně latentním a pozdně latentním včetně kongenitální syfilis. Biologické vzorky zahrnovaly kožní a slizniční stěry, plnou krev, séra, krevní sraženiny, likvory a tkáně. Celkem jsme vyšetřili 219 klinických vzorků, z toho 142 sér, 42 stěrů, 32 sraženin, 1 likvor, 1 tkáň a 1 plnou krev. Z tohoto výčtu vzorků jsme nalezli 9 pozitivních stěrů od 6 dospělých pacientů ve stádiu primární a sekundární syfilis. U novorozence s kongenitální syfilis jsme prokázali tyto pozitivní vzorky: 1 likvor, 1 sérum a 1 stěr. U všech vyšetřovaných vzorků jsme provedli detekci treponemální DNA pomocí dvoukrokové (nested) PCR na gen tmpC (TP0319, kódující membránový lipoprotein). PCR produkty (z genu TP0319) o velikosti 451 bp jsme štěpili pomocí 3 restriktáz (Sac I, Nhe I, Dde I), k odlišení jednotlivých kmenů Treponema pallidum. Pro přesnou kmenovou typizaci jsme amplifikovali geny TP0548, TP0136, TP0319 a vzniklé PCR produkty jsme sekvenovali. Výsledky sekvenací ve dvou případech ukázaly výskyt kmene sekvenčně totožného s kmenem SS14 a v dalších dvou případech jsme nalezli sekvenční změny v lokusech TP0548 a TP0136, které prokázaly výskyt unikátních syfilitických kmenů, doposud nepopsaných u Treponema pallidum subsp. pallidum. U jednoho vyšetřovaného novorozence jsme porovnali počet molekul DNA ve 2 různých biologických materiálech (v séru a likvoru). Počty treponemální DNA byly shodné a činily asi 100 000 treponemálních molekul DNA v 1 mikrolitru vzorku. Toto ukazuje na skutečnost, že u kongenitální syfilis je počet mikroorganismů v séru a likvoru srovnatelný a nápadně vyšší než u dospělých pacientů. Molekulárněgenetická detekce syfilis byla u vyšetřovaných dospělých pacientů možná jen u slizničních (faryngeálních a genitálních) stěrů a dále z 1 plné krve. Původce syfilis Treponema pallidum subsp. pallidum nebyl v séru dospělých pacientů detegován. Závěrem lze konstatovat, že molekulární typizace a identifikace jednotlivých kmenů a izolátů T. p. pallidum přispěje zásadně k rozvoji epidemiologie syfilis a přinese i možnost rozlišení mezi reinfekcí a reaktivací syfilitického procesu. |
| Související projekty: |