Stanovení vybraných parametrů imunitního systému ryb
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2009 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Imunitní systém ryb můžeme rozdělit na složku buněčnou a humorální. Buněčná složka nespecifická je tvořena fagocyty a cytotoxickými buňkami, specifická T a B lymfocyty. Humorální imunitu nespecifickou zastupují lektiny, lytické enzymy (např. lysozym) a komplement, specifickou protilátky třídy IgM. Na našem pracovišti měříme z nespecifických složek imunity oxidativní vzplanutí fagocytů v plné krvi, aktivitu komplementového systému v plasmě a koncentraci lysozymu v kožním mukusu. Ze složek specifické imunity stanovujeme koncentraci protilátek IgM. Oxidativní vzplanutí fagocytů se provádí luminiscenční metodou. Plná heparinizovaná krev je po naředění smíchána s luminolem a aktivátorem, který se váže na receptory fagocytů a způsobuje jejich aktivaci. Nejdůležitějšími ukazateli oxidativního vzplanutí fagocytů jsou vrchol luminiscenční kinetické odpovědi, čas jeho dosažení a celkové vyprodukované množství reaktivních metabolitů kyslíku. Ke stanovení aktivity komplementu v plasmě se používá luminiscenční metoda. Využívá rekombinantní bioluminiscenční bakteriální kmen E. coli. Světelná emise vyžaduje přítomnost ATP, produkovaného pouze živými buňkami. Intenzita produkovaného světla odpovídá viabilitě bakterií. Z grafu závislosti luminiscence na čase je odečtena doba potřebná pro usmrcení 50% bakterií. Množství lysozymu lze stanovit in vitro radiální difúzí v agaróze. Na agarové plotny obsahující Micrococcus luteus se nanesou vzorky kožního mukusu nebo kalibrační roztok lysozymu. Průměry projasněných difúzních zón se přepočítají podle kalibrační křivky na mg/ml vzorku. Celkové množství protilátek IgM v rybí plasmě lze stanovit precipitací síranem zinečnatým, který specificky dehydratuje proteiny, ty se odpojí od roztoku a jsou odděleny centrifugací. Množství IgM ve vzorku (v g/l) je pak vypočítáno jako rozdíl mezi celkovým obsahem proteinů a proteinů obsažených v supernatantu po precipitaci a centrifugaci. Tato práce byla podpořena grantem GAČR 524/07/0188. |
| Související projekty: |