Kometová analýza jako nástroj pro stanovení integrity DNA spermií. Porovnání různých protokolů.

Varování

Publikace nespadá pod Pedagogickou fakultu, ale pod Lékařskou fakultu. Oficiální stránka publikace je na webu muni.cz.
Autoři

MATEJOVIČOVÁ Milena KRÁLÍKOVÁ Michaela MELOUNOVÁ Jitka ŽÁKOVÁ Jana CRHA Igor

Rok publikování 2009
Druh Konferenční abstrakty
Fakulta / Pracoviště MU

Lékařská fakulta

Citace
Popis Kometová analýza je metoda, jejíž pomocí lze stanovit fragmentaci DNA v jednotlivých buňkách. Buňky s poškozenou DNA mají po elektroforéze tvar komety: kruhovitou „hlavu“ reprezentující nepoškozenou DNA a protáhlý „ohon“, jehož délka a intenzita závisí na míře poškození DNA a velikosti fragmentů. Specifika aplikace kometové analýzy na spermie spočívají v odlišné organizaci chromatinu spermií. Ten je, na rozdíl od somatických buněk, asi šeskrát kompaktnější a obsahuje díky protaminům velké množství disulfidových vazeb. Proto je při sledování poškození DNA spermií rozhodujícím krokem efektivní lýza buněčných struktur a denaturace DNA bez zvyšování míry fragmentace. V této práci jsme sledovali kometovou analýzou bazální poškození DNA ve spermiích mužů,podstupujících vyšetření ejakulátu v Centru asistované reprodukce FN Brno. V několika experimetech bylo základní poškození DNA zmrazených vzorků porovnáno s poškozením DNA v čerstvě odebraných vzorcích spermatu, které byly analyzovány v den odběru. Nepozorovali jsme rozdíly v poškození DNA. Dále jsme porovnávali 2 různé metody buněčné lýzy. Protokol A zahrnoval proteolýzu pomocí proteinázy K v průběhu lýzy a protokol B využíval k destrukci membrán a chromatinových struktur jako hlavní detergent dijodosalicylát lithný. V obou protokolech byl navíc použit dithiothreitol, sloužící k redukci disulfidových vazeb. Jeho užití zároveň s proteinázou K v protokolu A však zvyšovalo míru poškození DNA spermií. Nejméně poškozená DNA byla pozorována při vyšetřeních, při kterých byl aplikován protokol B.
Související projekty:

Používáte starou verzi internetového prohlížeče. Doporučujeme aktualizovat Váš prohlížeč na nejnovější verzi.